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制药信息微载体细胞培养
浏览次数:次   发布时间:2015-07-09 09:46:26

 制药信息微载体细胞培养

在许多研究中,如果能够不使用蛋白水解酶类或者螯合试剂就能收获或者转移培养的细胞将是很重要的.蛋白水解酶类和螯合试剂都常常改变细胞的活力和质膜的完整性.微载体使得不使用此两种试剂而移种细胞或者放大培养成为可能. 它们也提供了细胞生长的便利表面, 细胞可以从一个培养容器转移到另一个培养容器中而或者直接用于实验而不必从微载体上取下. 细胞可以在微载体之间和细胞培养瓶或者细胞单层上时,细胞迁移到微载体上,然后可以转移到其他的培养容器中这种转移细胞的方法已经用于通常对蛋白水解酶类敏感的牛肺动脉内皮细胞的培养(120) .该技术的一项变化是允许细胞从汇合的微载体迁移到新的微载体上去体培养并加入新的微载体可以保持延长的 CHO细胞指数生长期.细胞在微载体之间的迁移可以通过低钙离子浓度的培养基来增强
在病毒生产期,新的微载体也可以加入到长至汇合的微载体培养中去.Manousos 等人(98)使用此项技术引发了新一轮的细胞增殖和致癌 RNA病毒的生产的热潮.也可能通过在汇合微载体与新微载体一同沉降来放大人类成纤维细胞的微载体培养.几小时之后,细胞的迁移造成新微载体上的接种但是,此项技术的适用性受细胞移动性的限制.一些类型的细胞,如肝细胞只表现出有限的移动性,不能在微载体和其它培养表面之间迁移.细胞在微载体之间迁移的机会可以通过将培养保持静止几个小时来增加.偶尔的搅拌可以消除微载体聚集的任何倾向. 
微载体在细胞转移方面还有其他的用途.例如,将 Cytodex 与腹膜液一起培养 10min之后, 巨噬细
胞粘附到 Cytodex 上而且可以通过简单的分级沉降从其他腹膜细胞中分离出来(H. Slater,私人交流,.然后可以将粘附到微载体上的巨噬细胞转移到其他的培养容其中以作研究. 
微载体也可以用于克隆细胞.可以按照将近每个微载体一个细胞的接种浓度来培养,经过一段细胞贴附所必需的时间之后, 用巴斯德移液管将那些只带有一个细胞的微载体转移到克隆盘中.在此方法中,
微载体提供了一个容易操作的培养表面.相似地,汇合的微载体可以浸没在半固体培养基中形成营养层. 
显微镜方法 
Cytodex 微载体可以作为细胞培养底层,进行各种显微镜方法研究.研究使用标准技术如扫描电子显
微镜方法,透射电子显微镜方法(图 8)和不同类型的光学显微镜显示,以及显
微生物化学)等.使用微载体进行显微研究的优点是培养底层易于操控而且当使
用包埋技术时不需要收获细胞.基于葡聚糖基质的Cytodex 微载体(参见 2.1 小节)在切片以前可被通常
的包埋液渗透.使用细胞生长到汇合的微载体时,细胞粘附到培养基底层的横截面很容易观察到微载体培养的常规样品经过处理以后可以进行详细的显微检查,避免了含有很多盖玻片的培养实验培养的样品处理后可以用于镜检而无需大量的细胞




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